Co-Immunpresipitasjon Protocol

July 25

Co-Immunpresipitasjon Protocol


Co-immunoprecipitation protokollen (Co-IP) er en mye brukt fremgangsmåte for å analysere protein interaksjon. Fremgangsmåten består generelt av tre trinn. Et antistoff blir introdusert til et cellelysat, er antistoff-protein-komplekset er kjemisk bundet, og proteinet er identifisert ved analyse.

Co-Immunpresipitasjon Oppsummering

Co-IP består av en rekke trinn for å sikre nøyaktige testresultater. Det første trinnet krever et antistoff som er spesifikt for proteinet som skal tilsettes. I det andre trinnet blir protein-G eller protein-A Sepharose som brukes til å binde antistoff-proteinkompleks. Til slutt, sekvensering av et renset proteinbånd, eller Western blot-analyse, blir brukt til å identifisere den ko-utfelt protein.

Generelle Steps

Protokollen kan deles inn i tre generelle fremgangsmåten i uttrykket av mekanikken i prosessen. Det første trinnet er arbeidsflyt for å fullføre prosedyren i minst mulig tid. Det andre trinnet er generelle betraktninger for prosedyren. Det siste trinnet er feilsøking.

spesifikke Steps

Arbeidsflyten begynner med fremstilling av kulturen for blotting analyse og konkluderer med bestemmelsen av nærværet av eventuelle proteiner. Generelle betraktninger består av nøkkeltrinnene som for eksempel pre-rensing, valg av buffere og valg av Protein A eller Protein G harpiks. Feilsøking av avtaler med slike spørsmål uten påvisning av protein, binding av antistoffer mot proteinene, antistoff-fragmenter og muligheten for en mislykket Co-IP.